沉淀法

　?。?）鹽析沉淀法

　　這是根據(jù)不同蛋白質(zhì)在一定濃度的鹽溶液中溶解度降低程度不同，而達(dá)到彼此分離的方法，是蛋白質(zhì)和酶提純工藝中較早采用，且至今仍廣泛應(yīng)用的方法。

 

　　蛋白質(zhì)易溶于水，因?yàn)槠浞肿拥?COOH-NH2和-OH都是親水基團(tuán)，這些基團(tuán)與極性水分子相互作用形成水化層，包圍于蛋白質(zhì)分子周圍形成1~100nm大小的親水膠體，從而削弱了蛋白質(zhì)分子之間的作用力。

 

　　當(dāng)大量鹽加到蛋白質(zhì)溶液中，高濃度的鹽離子（如硫酸銨的SO42-和NH4+）有很強(qiáng)的水化力，可奪取蛋白質(zhì)分子的水化層，使之"失水"，于是蛋白質(zhì)膠粒凝結(jié)并沉淀析出。

 

　?。?）等電點(diǎn)沉淀法

　　是利用蛋白質(zhì)在等電點(diǎn)時(shí)溶解度較低，而各種蛋白質(zhì)具有不同的等電點(diǎn)來分離蛋白質(zhì)的方法，稱為等電點(diǎn)沉淀法。

 

　　由于等電點(diǎn)時(shí)蛋白質(zhì)的凈電荷為零，失去了水化膜和分子間的相斥作用，疏水性氨基酸殘基暴露，蛋白質(zhì)分子相互靠攏聚集，易形成沉淀析出。

 

　?。?）有機(jī)溶劑沉淀法

　　此法原理是:與水互溶的有機(jī)溶劑(如甲醇、乙醇等)能使某些蛋白質(zhì)在水中的溶解度顯著降低。在室溫下，有機(jī)溶劑不僅能夠引起蛋白質(zhì)的沉淀，而且伴隨變性。

 

　　因此，通常要將有機(jī)溶劑冷卻，然后在不斷的攪拌下加入有機(jī)溶劑，以防止局部濃度過高，蛋白質(zhì)變性問題就可以很大程度上得到解決。

 

　　用此法析出的沉淀一般比鹽析法易過濾或離心沉降，分離后的蛋白質(zhì)沉淀應(yīng)立即用水或者緩沖液溶解，以達(dá)到降低有機(jī)溶劑的濃度的目的。此法在血液制品的制備過程中較多使用。